流通池法——阿霉素脂质体的溶出研究

流通池法（流池法）一直被认为是研究微粒和脂质体溶出行为的方法，有不少文献对此进行了深入的研究和探讨。所以，今天跟大家分享Wenmin Yuan等人利用流通池法，研究复合阿霉素（DOX）脂质体制剂溶出的案例。

本研究指出，流通池法是一种可靠的复杂脂质体产品溶出分析方法，该方法受到操作误差的影响较小，并且可以在不同脂质体制造商之间轻松地进行方法转移。

1. 材料和方法

透析管的分子量截止值（MWCO）：300 kDa。

DOX脂质体样品量：将0.4ml的DOX脂质体制剂（2mg/ml）与1.2ml溶出介质混合。

溶出介质：100mM NH4HCO3，75mM 2-(N-吗啉)乙磺酸（MES）和5% w/v 羟丙基环糊精（HP-CD），5% w/v蔗糖，0.02% w/v NaN3（pH6）。

溶出介质体积：78.4ml。

温度：37℃、45℃和 55℃。

流速：16 mL/min。

模式：闭环。

紫外检测波长：480 nm。

2. 结果

2.1 温度对溶出度的影响

如下图所示，在55℃、45℃和37℃下，7小时内DOX的累积溶出率分别为91.0% ±1.6%、42.4% ±0.6%和4.5% ±0.1%。

随着温度的升高，溶出量显著增加。研究选择45°C作为后续测试温度，是因为在此温度条件下，样品在24小时内几乎*溶出（95.3%±1.2%），但溶出速率不会太快，可以区分制剂之间的差异。

2.2 日常变异性

使用相同的样品制剂在三个不同日期进行溶出试验，分析日常变异性。实验结果表明该方法的日常变异是可控的。在溶出曲线上没有观察到显著差异（在第1天和第2天，f2=73.4；在第1天和第3天，f2=63.4；在第2天和第3天，f2=81.0）。

2.3 脂质体组成及制备方法对溶出的影响

将市售的Doxil®作为参比制剂。处方中使用HSPC替代POPC，样品可在10小时内迅速、*地溶出。脂质体处方中其他成分与Doxil®相同，但制剂的物理化学性质略有不同。

研究中制备的所有制剂的溶出率均低于市售Doxil®。在制备的脂质体中，与低压均质（L-DOXp）相比，高压均质（H-DOX）制备的脂质体具有更快的溶出率。由于H-DOX制剂的平均粒径更小，粒径分布更广，这可能是DOX溶出速度加快的原因。

脂质体挤出前制备多层脂质体（MLV）的方法对DOX的溶出也有影响。在硫酸铵水溶液（L-DOXp）中注入脂质溶液制备MLV时，DOX的溶出比在水溶液（L-DOXi）中高压注射脂质溶液制备MLV时慢。

3. 讨论

本研究建立的流通池测定法的主要局限性在于：测试条件本身决定了脂质体溶出结果。实验温度对DOX溶出率有显著影响，终选定的流通池法参数与生理条件相差甚远。因此，该方法可主要用于区分阿霉素脂质体制剂之间的相对差异，而不是定义体内相关性。

流通池法分析条件的主要优化标准是在12小时内看到超过80%的药物从Doxil®中溶出，以便能够在24小时内鉴别出具有更快或更慢溶出行为的脂质体制剂。

研究还发现，成分相同但采用不同方法制备的制剂，具有稍微不同的物理化学性质的制剂在体外可表现出非常不同的溶出。

4. 结论

本研究对流通池法的参数进行了优化，以适用于不同工艺制备的阿霉素脂质体脂质体体外溶出测试。已建立的流通池法可用于区分普通脂质体和新型阿霉素脂质体之间的可能差异，为设计更好的制剂提供有用的反馈，并有望可以将这些制剂的体外溶出行为与体内药代动力学结果进行联系。

原文：Developmentof a Flow-Through USP-4 Apparatus Drug Release Assay to Evaluate Doxorubicin Liposomes, Wenmin Yuan等, The AAPS Journal.

锐拓仪器 技术部